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Innovation TM Extreme C18反相色谱柱操作说明
简介
(1) 是反相液相色谱分析方法开发的第一选择；
(2) 高纯度硅胶骨架，重金属含量< 5ppm，具有高表面覆盖率，最大表面去活处理，离子交换活性以及与金属螯合作用降至最低；
(3) 单功能高密度键合，其键合相非常稳定，非常可靠，LC-MS Q1检测无键合相泄漏，产品批次之间的差别小于1%；
(4) 两次超临界流体封端，最大程度消除硅醇基效应；
(5) 理论塔板数大于80000/m，极佳峰形；
(6) 极高稳定性，在pH 2~8条件下连续运行20000床体积，保留时间，柱效及峰形变化极小；
(7) 在市场上的所有C18产品中，Extreme C18(单官能团键合)疏水性只比Ultimate C18(双官能团键合)和Premier C18(三官能团键合)稍低，柱承载能力非常高，非常适合用于制备分离。
特征
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技术参数 |
范围 |
技术参数 |
范围 |
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B型球形硅胶颗粒直径(um) |
3 or 5 |
使用温度范围(℃) |
≤70 |
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孔径(Å) |
100 |
键合密度(umol/m2) |
3.2 |
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表面积(m2/g) |
450 |
硅烷泄漏* |
无 |
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重金属含量(ppm) |
<5 |
USP Code |
L1 |
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使用pH值范围 |
2~8 |
100%水相条件下使用 |
不能 |
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*LC-MS Q1测试 |
应用
Extreme C18(单官能团键合)，Ultimate C18(双官能团键合)和Premier C18(三官能团键合) 都是代表世界先进水平的最通用型C18，适用绝大数小分子化合物的分析。中性、酸性、两性和碱性化合物在Extreme C18上均能取得良好的分离。由于超临界流体封端最大程度消除硅醇基效应，碱性化合物会取得对称的峰形，不会拖尾。对于酸性和两性化合物，调流动相到pH 2~3左右质子化酸性官能团时可取得极佳峰形和良好分离。对于碱性化合物，调流动相到pH 1~3时可取得极佳峰形。但在许多多数情况下，也可将流动相pH调至4~8甚至更高，以维持化合物稳定性或改变分离选择性。pH4~8时推荐使用10~100mM缓冲盐溶液。对于非常罕见峰明显拖尾的强碱性化合物，推荐添加10~20 mM三乙胺或5~10 mM二甲基辛胺改善峰形。这个时候特别推荐使用BetaBasic C18或TX产品。
柱性能
Innovation TM Extreme C18色谱柱性能参数(柱效、拖尾因子、测试条件等)详见产品测试证书。
色谱柱安装和使用
旋下色谱柱两端柱头，按照色谱柱标签上液体流动方向将其连接于仪器。色谱柱不使用时，旋上两端柱头。
样品和流动相
为了避免堵塞色谱柱，样品和流动相使用前，须过0.45um滤膜、甚至孔径更小的滤膜。为有机相和水相混合相，例如甲醇-水、乙腈-水。流动相脱气后方可使用。
操作注意点
承载溶剂：由于C18键合相为非极性相，因此，流动相最好为甲醇-水、乙腈-水等混合相。一般情况，随着有机相比例的增加，样品的保留时间会缩短。梯度洗脱时，10%甲醇(或乙腈)或乙腈常作为初始流动相，100%甲醇或乙腈常作为终点流动相。需要说明的是，C18键合相可以与大多数有机相兼容。对于新的色谱柱，柱内含有甲醇和水混合相，因此，用户初次使用的流动相中不能含有与之反应的成分。应首先用60%左右甲醇冲洗色谱柱，以除去色谱柱在包装和运输过程中引入的杂质。然后使用目标流动相。如果柱压或基线出现波动，说明柱内有气泡，此时，应打开排气阀，同时把流速调至更高，并维持2~5min，以除去气泡，例如，对于250×4.6mm色谱柱，可将流速调至3mL/min。
pH：推荐pH使用范围为2~8。
温度：如果流动相黏度较高，可采用升高柱温的办法以提高分离效率。虽然最高操作温度为70oC，但是，为了更长的使用寿命，建议最佳操作温度为<50 oC，在温度高于70 oC下连续使用，可能损坏色谱柱，尤其是在pH>8或pH<2条件下，对色谱柱损坏更大。
流速：对于5um 250×4.6mm色谱柱，标准流速为1mL/min。
柱保护：为了防止流动相或样品中的杂质，在色谱柱之前最好安装一个保护柱或预柱。通常情况下，预柱能阻止来自于样品、流动相、泵或进样器的杂质，对色谱柱起到保护作用。
或
储存
当色谱柱长时间不使用时，色谱柱应储存在100%甲醇或乙腈中。如果流动相中含有缓冲盐，使用后，须使用50%甲醇-水或50%乙腈-水冲洗30min~60min。再用100%甲醇或乙腈冲洗30min~60min，保存。为了防止色谱柱床风干，两端应旋上柱堵头。
三烯类仨环抗抑郁药物HPLC分离（举例）
Innovation TM Extreme C18是通用型C18(单功能团高密度键合)。疏水性和柱容量因子仅次于Premier C18和Ultimate C18，高于市场上绝大多数C18产品，特别适合用于制备分离。孔径：100Å；表面积: 450m2/g；超临界流体封端；pH适用范围2-8。应用范围非常广泛，绝大数化合物可获得对称峰形，中性、酸性、两性和碱性化合物在Ultimate C18上均能取得良好的分离。Premier C18(三功能团高密度键合)，Ultimate C18(双功能高密度键合)和Extreme C18(单功能团高密度键合) 使用超临界流体封端，最大程度消除硅醇基效应。Ultimate C18，Extreme C18和Explorer C18是是反相液相色谱分析方法开发的第一选择!
色谱柱: Innovation TM Extreme C18 5um 15cm x 4.6mm (2154615-U);
流动相: 25 mM 磷酸钠 (pH 7) (30%) :甲醇 (70%);
流速: 1.5 mL/min; UV 检测波长: 254 nm;
1. 去甲奥多塞平 (demethyl doxepin); 2. 普罗替林 (protriptyline); 3. 去甲丙咪嗪Desipramine; 4. 去甲替林 (Nortriptyline); 5. 多塞平 (Doxepin); 6. 丙咪嗪(Impramine); 7. 阿米替林 (Amitriptyline); 8. Trimpramine
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