Innovation TM ZW&A C18反相色谱柱操作说明

简介

(1) 高纯度硅胶骨架，重金属含量< 5ppm，具有高表面覆盖率；

(2) 单功能高密度键合，LC-MS Q1检测无键合相泄漏，产品批次之间的差别小于1%；

(3) 理论塔板数大于80000/m，极佳峰形；

(4) 极高稳定性，在pH 2~8条件下连续运行20000床体积，保留时间，柱效及峰形变化极小；

(5) 部分封端，因此特别适合两性和酸性化合物分离分析。

特征

应用

   中性、酸性、两性和部分碱性化合物在ZW&A C18上均能取得良好的分离。尤其适用于酸性及两性小分子化合物的分析。对于酸性和两性化合物，调流动相到pH 2~3左右质子化酸性官能团时可取得极佳峰形和良好分离。对于碱性化合物，调流动相到pH 1~3时可取得比较好的峰形。但在许多情况下，也可将流动相pH调至4~8甚至更高，以维持化合物稳定性或改变分离选择性。pH 4~8时推荐使用10~100mM缓冲盐溶液。对于峰明显拖尾的强碱性化合物，推荐添加10~20mM三乙胺或5~10mM二甲基辛胺改善峰形。这个时候特别推荐使用BetaBasic C18或TX产品。

柱性能

Innovation TM ZW&A C18色谱柱性能参数(柱效、拖尾因子、测试条件等)详见产品测试证书。

色谱柱安装和使用

    旋下色谱柱两端柱头，按照色谱柱标签上液体流动方向将其连接于仪器。色谱柱不使用时，旋上两端柱头。

样品和流动相

    为了避免堵塞色谱柱，样品和流动相使用前，须过0.45um滤膜、甚至孔径更小的滤膜。流动相为有机相和水相混合相，例如甲醇-水、乙腈-水。流动相脱气后方可使用。

操作注意点

承载溶剂：由于C18键合相为非极性相，因此，流动相最好为甲醇-水、乙腈-水等混合相。一般情况，随着有机相比例的增加，样品的保留时间会缩短。梯度洗脱时，10%甲醇或乙腈常作为初始流动相，100%甲醇或乙腈常作为终点流动相。需要说明的是，C18键合相可以与大多数有机相兼容。对于新的色谱柱，柱内含有甲醇(或乙腈)和水混合相，因此，用户初次使用的流动相中不能含有与之反应的成分。应首先用60%左右甲醇冲洗色谱柱，以除去色谱柱在包装和运输过程中引入的杂质。然后使用目标流动相。如果柱压或基线出现波动，说明柱内有气泡，此时，应打开排气阀，同时把流速调至更高，并维持2~5min，以除去气泡，例如，对于250×4.6mm色谱柱，可将流速调至3mL/min。

pH：推荐pH使用范围为2~8。

温度：如果流动相黏度较高，可采用升高柱温的办法以提高分离效率。虽然最高操作温度为70℃，但是，为了更长的使用寿命，建议最佳操作温度为<50℃，在温度高于70℃下连续使用，可能损坏色谱柱，尤其是在pH>8或pH<2条件下，对色谱柱损坏更大。

流速：对于5um 250×4.6mm色谱柱，标准流速为1mL/min。

柱保护：为了防止流动相或样品中的杂质，在色谱柱之前最好安装一个保护柱或预柱。通常情况下，预柱能阻止来自于样品、流动相、泵或进样器的杂质，对色谱柱起到保护作用。

或

储存

    当色谱柱长时间不使用时，色谱柱应储存在100%甲醇或乙腈中。如果流动相中含有缓冲盐，使用后，须使用50%甲醇-水或50%乙腈-水冲洗30min~60min。再用100%甲醇或乙腈冲洗30min~60min，保存。为了防止色谱柱床风干，两端应旋上柱堵头。

胞内代谢物(糖酵解，戊糖磷酸途径和三羧酸循环) 离子对色谱分析（举例）

    Innovation TM ZW&A C18特别适合酸性和两性小分子化合物分离分析(也适用于中性和弱碱性小分子化合物分离分析，也适用于多肽分离纯化，多肽分析，蛋白质肽图)。孔径：120Å；表面积：300m2/g；部分封端；pH适用范围1.5-8。详细的应用请参阅我们的产品手册。下面以胞内代谢物离子对色谱分析为例。

    胞内代谢(糖酵解，戊糖磷酸途径和三羧酸循环)是生产许多重要的药物例如防止心脏病药物的最重要的途径。糖、磷酸糖、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、羧酸等的准确分析对揭示代谢途径有非常重要的意义。

Innovation TM ZW&A C18 5um 15cm x 2.1mm HPLC色谱柱可同时分析许多代谢产物。典型的LC-MS/MS MRM图在下: 

流动相A: 10mM三正丁胺 (pH值用乙酸调整到pH5)

流动相B: 甲醇

电离模式: 负

梯度: 95%流动相A到10%流动相A (80 miniutes)